NP-40裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、western blot、IP 、Co-IP等。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂等干扰物质，不能用Bradford法测定蛋白浓度。

主要成分：

1% NP-40、50mM Tris-Hcl、150mM NaCl、以及Sodium Orthovanadate，Sodium Fluoride，EDTA等

使用说明：

1、使裂解液充分融解，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，根据具体实验需求可选择加入蛋白酶抑制剂。

2、根据样品的类型进行如下操作：

对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（若血清中的蛋白没有干扰，可不洗）。按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，去除培养基，用手指把细胞用力弹散，按照6孔板每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）使用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

3、样品充分裂解后，4℃ 10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western blot、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加150ul裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200或250ul。

4、充分裂解后，10000--14000g离心3-5min，取上清，即可进行后续的实验。

注意事项：

1.为避免产品反复冻融，可根据用量分装使用。

2.裂解时需低温进行，于4摄氏度或者冰上处理。

3.需自备PMSF，PMSF稳定性非常弱，半衰期只有0.5h，所以必须现配现用。

4.实验时穿好实验服，戴好一次性手套。

保存条件：

2-8℃保存，1年有效。

温馨提示：

使用前请详细阅读使用说明书，在有效期内使用，并做好个人防护。使用后请妥善处置废弃物。