酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,简写ELISA或ELASA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。
主要用途:
ELISA试剂盒的主要用途包括抗体检测、抗原检测、蛋白质检测、细胞因子检测等。
抗体检测:ELISA试剂盒可用于检测体液中的特定抗体,如病毒抗体、抗细胞自身抗体等。这对于疾病的诊断、感染的筛查以及免疫学研究非常重要。
抗原检测:试剂盒也可用于检测样品中的特定抗原,如病原体抗原、肿瘤标志物等。这在疾病的早期诊断、药物治疗监测以及流行病学调查中具有重要意义。
蛋白质检测:ELISA试剂盒可用于定量检测样品中特定蛋白质的浓度,如细胞因子、酶类、激素等。这对于生物学研究、临床诊断和药物研发等都具有重要的应用价值。
细胞因子检测:试剂盒还可用于检测样品中的细胞因子,如白细胞介素、干扰素等。这对于炎症反应的评估、免疫调节研究以及免疫治疗监测具有重要意义。
此外,ELISA试剂盒还可以提供定量测定目标物质的浓度,通过与标准曲线的比较,可以获得准确的目标物质浓度数据。这一特性使得其在药物开发和药物筛选、环境监测、食品安全检测、病毒学研究和植物学研究等领域都有广泛的应用。
检测原理:
主要基于抗原与抗体的特异性免疫反应,通过将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。这种方法的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体保持其免疫学活性,而酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应,通过洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。随后加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。加入酶反应的底物后,底物被酶催化水解或氧化还原反应而成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,因此可以根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,这种方法具有很高的敏感度,能够间接地放大免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
实验流程:
- 接收样本,核对编号,客户提供试剂盒或公司代购。
- 提取样本,样本检测,导出数据整理报告,发送结果。
样本要求及运输条件:
- 血清:全血标本请于室温放置1-2小时或4℃过夜后于2-8℃ 2000-3000rpm离心15分钟左右。取上清至离心管中-80℃保存,干冰运输。
2、血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,2000-3000rpm离心20分钟左右,取上清至离心管中-80℃保存,干冰运输。
3、胸腹水、脑脊液、尿液:用无菌管收集。2000-3000rpm离心10分钟左右。取上清至离心管中-80℃保存,干冰运输。
4、细胞培养上清:检测分泌性的成份时,2000-3000rpm离心10分钟左右,取上清至离心管中-80℃保存,干冰运输。
5、细胞样本(细胞量至少106):
贴壁细胞:将细胞用PBS冲洗2次后,用细胞刮将细胞小心刮下来收集到离心管中,将细胞悬液1000rpm,离心5min。弃上清留细胞沉淀,干冰运输。
悬浮细胞:细胞悬液1000rpm,离心5min。弃上清留细胞沉淀,干冰运输。
6、动植物组织样本(干冰运输),组织重量大于50mg,保存于-80℃或者液氮,干冰运输。