使用Trizol或试剂盒将样本中的RNA从组织分离纯化出来,再通过逆转录酶合成cDNA,用于下游实验,主要为qPCR检测。
实验流程:
取材-RNA提取-测浓度-逆转录成cDNA
其中mRNA、lncRNA、circRNA为普通逆转录;
miRNA采取特异性逆转录(需提供基因名称和种属,方便设计引物用于特异性逆转录 ),默认做茎环法的逆转录,如需做加尾法逆转录请特别备注说明。
样本要求及运输条件:
1、组织样本:
(1)动物组织:尽可能新鲜和足量的组织(>50-100mg,至少绿豆大小),保存于-80℃或者液氮。
(2)植物组织:新鲜的叶、果肉、种子最少100mg,保存于-80℃或者液氮。
2、细胞样本:
细胞量要求:每个实验组细胞数量保证大于106以上;6孔板70-80%;T25培养瓶70-80%。若检测指标较多,需适当增加样本量。
3、全血:EDTA抗凝管收集1毫升新鲜血液,-80℃保存,干冰运输。
4、血清或血浆:1毫升以上,-80℃保存,干冰运输。
5、RNA样本:OD 260/280为1.8-2.0,浓度为100ng/μL,-80℃保存,干冰运输。