本实验是将组织细胞内的抗原可视化过程，可直接在组织切片、细胞涂片或培养细胞爬片上原位显示某些蛋白质或多肽类物质，并可精确到亚细胞结构水平。载玻片上的组织细胞经过预处理（脱蜡至水、抗原修复等）后，孵育相应的抗体，此时抗原（多肽、蛋白质、外源性物质等）被第一抗体特异性识别结合，然后把第一抗体作为抗原继续通过第二抗体特异性识别结合（第二抗体上有标记特定物质），若第二抗体标记的特定物质为辣根过氧化物酶（HRP），可与DAB在特定条件下反应形成棕褐色沉淀，最后通过显微镜观察。

主要用途：

免疫组织化学技术可借助显微镜的显像与放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质（如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、酶、激素、病原体及受体等），并对其进行定位、定性及定量的研究。在病理学中，免疫组化技术常用来进行肿瘤的诊断及鉴别诊断，也可通过此技术对肿瘤进行更细化的分类。

检测原理：

基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原。

实验流程：

脱蜡与水化-抗原修复-灭活内源性过氧化物酶和生物素-血清封闭-孵育一抗-孵育二抗-DAB显色-苏木素复染-脱水与透明-封片-显微镜镜检。

样本要求及运输条件：

1、提供固定完全的组织样本。组织离体后，选择合适的固定液和容器立即固定，固定液的量建议大于组织体积的10-15倍，固定时间建议24-48h，大标本固定12h，再切开固定。固定完全后尽快送检。标本常温（24℃左右）或冷藏（4℃）固定，切勿冷冻结冰，固定样本常温运输送样。

2、提供编号清晰的蜡块或蜡头。

3、石蜡切片常温运输，冰冻切片-80℃保存干冰运输。

4、涂片和爬片必须充分固定，常温运输。

注意事项：

1、客户提供的抗体，要求先做预实验，除了正式实验样本外，需客户提供预实验样本（预期高表达，蜡块和切片皆可）和阳性对照。

2、抗体：一般指一抗（客户检测目的蛋白），需要客户提供准确的抗体名称、品牌货号，根据抗体货号可以确认抗体的应用（检测种属和检测方式）是否符合基本要求，否则存在风险，具体以预实验为准。接收抗体时，需确认抗体体积与保存温度，建议至少10μl，多余可返还。二抗由我司提供，若客户提供特殊来源的一抗（如：绵羊来源），需客户提供相应二抗。

3、预实验确认效果后，再做正式实验。预实验结果由客户自行确认，我司可协助推荐，但不对最终结果作保证，预实验与正式实验间隔周期不要太久，建议3周内反馈。

4、同一个抗体用于不同种属、不同脏器，都需做预实验确认。

5、正式实验的趋势我司不做保证。