番红O-固绿染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织和骨组织区分开。
检测原理：
番红O是一种结合多个阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团(硫酸软骨素或硫酸角质素)结合。番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，简介反映了基质中蛋白多糖的含量和分部。当软骨组织受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析。固绿与胶原纤维结合，不宜褪色。
主要用途：
番红固绿染色常用于骨组织中，能将软骨组织和成骨组织区分开。
结果判读：
软骨呈鲜红色或橙红色，成骨呈绿色，部分结缔组织也呈红色。
实验流程：
脱蜡至水-固绿染色-洗涤-番红O染色-分化-脱水与透明-封片-显微镜镜检。
样本要求及运输条件：
1、提供固定完全的组织样本。组织离体后，选择合适的固定液和容器立即固定，固定液的量建议大于组织体积的10-15倍，固定时间建议24-48h，大标本固定12h，再切开固定。固定完全后尽快送检。标本常温(24℃左右)或冷藏(4℃)固定，切勿冷冻结冰，固定样本常温运输送样。
2、涂片和爬片必须充分固定。
3、石蜡切片常温保存运输，冰冻切片-80℃保存干冰运输。
