三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷和磷酸，并放出能量。磷酸和钠离子结合，在酶活性处形成无色的磷酸钙，磷酸钙经氯化钴处理形成磷酸钴，再经硫化铵处理形成棕黑色的硫化钴沉淀在酶活性部位。经酸预孵后，Ⅱ型纤维 ATP 酶活性被抑制，Ⅰ型纤维却保持着 ATP 酶活性，所以被染成了黑色或深褐色。
检测原理：
利用三磷酸腺苷酶（ATPase）的催化作用，通过钙激活法来区分I型（红肌，慢纤维）和II型（白肌，快纤维）肌纤维。具体来说，肌纤维ATPase染色液的原理是利用ATPase水解ATP产生能量，这种酶定位于骨骼肌，能够精确反映肌肉病理状态。在染色过程中，ATPase水解ATP为ADP和磷酸，磷酸与钙离子在酶活性部位结合形成无色的磷酸钙沉淀，经过氯化钴处理形成磷酸钴，再经硫化液处理形成棕黑色的硫化钴沉淀在酶活性部位，从而实现对肌纤维类型的区分。这种技术不仅对神经性肌萎缩和肌源性肌萎缩的诊断有一定价值。
主要用途：
适用于动物肌肉组织纤维的分型鉴定。
结果判读：
Ⅰ型肌纤维呈黑色或深褐色，Ⅱ型肌纤维呈浅灰色或无色。
实验流程：
冰冻切片入水-ATP染色-脱水封片-显微镜镜检
样本要求及运输条件：
- 新鲜肌肉组织-80℃保存，干冰运输。
- 冰切片子干冰运输（需是新鲜肌肉组织冰切片子，固定组织冰切片子不能染）。
