胶原纤维(Collagen Fiber)是结缔组织中分部最广含量最多的一种纤维,广泛分布于各种脏器,其中皮肤、巩膜、肌腱最丰富。Ⅰ型胶原纤维主要是骨、皮肤、肌腱纤维;Ⅱ型胶原纤维主要是软骨胶原;Ⅲ型胶原纤维主要在胚胎组织、成人血管、胃肠道;Ⅳ型胶原纤维主要在基膜中。天狼星红与其衬染液都是强酸性染料,易与胶原分子中的碱性基团结合,吸附牢固。偏振光镜检查,胶原纤维有正的单轴双折射光的属性,与天狼星红复合染色液结合后,可增强双折射,提高分辨率,从而区分两型胶原纤维。
主要用途:
天狼星红染色主要用于各种组织病变时,对胶原纤维异常或纤维增生的研究中,在普通光学显微镜下心脏血管等组织的胶原纤维被染成红色,在偏振光镜下对各种纤维化病变的分型和分级研究有一定的帮助作用。采用免疫组化技术也可显示Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维,但所用抗体昂贵,操作费时,采用天狼星红染色试剂较便宜,操作简单。
结果判读:
在普通光学显微镜下,胶原纤维呈红色,其他组织成分被染成黄色。偏振光显微镜下,
Ⅰ型胶原纤维显示很强的双折光性,在偏振光下呈黄色或红色,紧密排列。
Ⅱ型胶原纤维显示弱的双折光,呈多种色彩的疏松网状分布。
Ⅲ型胶原纤维显示弱的双折光,呈绿色的细纤维。
Ⅳ型胶原纤维显示弱的双折光,呈淡黄色,为基膜。
实验流程:
脱蜡至水-天狼星红染色-分化与脱水-透明封片-显微镜镜检。
样本要求及运输条件:
1、提供固定完全的组织样本。组织离体后,选择合适的固定液和容器立即固定,固定液的量建议大于组织体积的10-15倍,固定时间建议24-48h,大标本固定12h,再切开固定。固定完全后尽快送检。标本常温(24℃左右)或冷藏(4℃)固定,切勿冷冻结冰,固定样本常温运输送样。
- 涂片和爬片必须充分固定。
- 石蜡切片常温保存运输,冰冻切片-80℃保存干冰运输。
注意事项:
1、及时用偏振光显微镜进行观察与拍照,以保持鲜艳的色彩。也可用白光显微镜观察,但只能看到红、黄两种颜色。