细胞骨架包括微丝(microfilament)、微管(microtubule)和中间纤维(intermediate filament)。微管是细胞内的主要支架,并为细胞内物质运输指引方向。中间纤维是起主要支撑作用的细胞骨架成分,使细胞具有张力和抗剪切力。微丝维持细胞形态特征,使细胞能够运动和收缩。
微丝、微管和中间纤维位于细胞质中,实际上均由蛋白质分子单体以非共价键结合在一起构成多聚体蛋白,在形态上呈纤维状。细胞中的大多数多聚体纤维蛋白可以解聚(去组装)和再次聚合(组装),并由此参与调控细胞功能。
鬼笔环肽(Phalloidin)是从鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)中分离出来的一种七肽毒素,又称鬼笔鹅膏素,可特异性与细胞内聚合微丝中的丝状肌动蛋F-actin结合,与抗体相比,鬼笔环肽无物种限制,染色特异性极强,染色区和未染色区对比性非常清晰,而且标记后的肌动蛋白许多生理特性都得以维持。
主要用途:
对固定的组织切片(冰冻切片,不能用于石蜡切片)和细胞爬片进行肌动蛋白丝染色。
检测原理:
鬼笔环肽与细胞内聚合形式的肌动蛋白特异性结合,通过偶联的荧光素分子,从而显示微丝在细胞中的分布。
实验流程:
细胞固定-细胞通透-鬼笔环肽染色-PBS洗涤-DAPI染核-封片-显微镜镜检。
样本要求及运输条件:
- 提供固定组织或固定组织做的冰冻切片。
- 细胞爬片,4℃保存运输,切勿冷冻结冰。